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血紅蛋白是高等生物體內負責運載氧的一種蛋白質(縮寫為Hb或HGB)。是使血液呈紅色的蛋白。血紅蛋白由四條鏈組成,兩條α鏈和兩條β鏈,每一條鏈有一個包含一個鐵原子的環狀血紅素。氧氣結合在鐵原子上,被血液運輸。血紅蛋白的特性是:在氧含量高的地方,容易與氧結合;在氧含量低的地方,又容易與氧分離。血紅蛋白的這一特性,使紅細胞具有運輸氧的功能。
一、蛋白質的提取和分離一般分為四步:
1、樣品處理:包括洗滌紅細胞;血紅蛋白稀釋;離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。
2、粗分離:透析除去分子較小的雜質。
3、純化:通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質蛋白質除去。
4、純度鑒定:通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。
二、樣品處理
1、紅細胞的洗滌:
目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝固;離心將血液分層,用膠頭吸管吸出黃色血漿;用生理鹽水洗滌。
2、血紅蛋白的釋放:
在蒸餾水和甲苯作用下,紅細胞破裂釋放
3、分離血紅蛋白溶液:
離心分層;濾紙過濾去除脂溶性沉淀層;分液漏斗分出紅色透明液體。
4、透析:
裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中(PH為7.0)透析。
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